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时值盛夏,再次迎来了ELISA科研高峰期
发布时间:2018-08-06   点击次数:1386次

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在ELISA实验中,洗涤是关键步骤之一。而有一些参数会影响洗涤步骤的效果,这些参数包括吸液高度和吸入位置,这两者都能调整,以降低背景(残留量)和差异。下面大家就一起来看看今天的重点内容,上海通蔚生物与您初夏谈说ELISA抽吸的操作技巧。
残留液体中包含未结合的抗原或抗体,它们会增加背景信号。残留量越小,残留液体越少,转移到下一步的干扰液体也就越少。吸液高度会明显影响残留量;如果洗涤吸头与反应孔底部的距离稍大,那就会让残留量急剧增加。反之,如果洗涤吸头压着反应孔底部,那么也会使吸液效率降低,残留量增加。

 目前的洗板机一般使用两种类型的洗头:刚性和浮动的。浮动洗头中的吸头可在洗涤过程中自由上下移动,而刚性洗头则固定在适当的位置。使用刚性洗头的洗涤操作在优化起来更为复杂,因为你需要非常仔细地调整吸液高度。如果你们实验室使用几种不同的板,那可能会很耗时。在使用浮动洗头时,吸头会降到反应孔的底部。调整高度就不是很重要,因此洗头会下降到底部。
    抽吸的位置也对残留量有着重要影响;如果每个孔只使用一个抽吸点(这很常见,因为更快),那么抽吸的位置需要优化。zui佳的位置取决于洗头的性状,但它几乎不在反应孔的中间,即使这是所有洗头zui常见的默认位置。一般来说,zui佳位置在孔中间与孔壁之间的某处。
    反应孔的形状也会影响残留量。C形底(平底圆角)的微孔板一般会比那些平底尖角的微孔板残留量更低。
   

ELISA试剂盒如果没有自动洗板机,采用手工洗涤,那么也需要注意几点。使用8道或12道微量移液器,采用倒吸的方法进行洗涤;不同厂家的洗液不宜相互混用。洗板时需保证微孔板平放,将洗涤液注满各孔,但尽量避免漏液,以每孔300 μl为宜;板洗次数一般为3次,要保证洗板的浸泡时间,每次浸泡时间一般为30-60 秒;尽量减少洗液残留量,推荐每次洗板后进行拍板,并及时更换吸水纸,避免吸水纸的碎屑粘到反应孔内。
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