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人ELISA试剂盒样本的步骤
发布时间:2015-05-04   点击次数:984次

    因此可以说基因工程就是分子生物学的工程应用。人ELISA试剂盒现在基因工程所展现出的强大生命力和巨大的经济发展潜力完全得益于分子生物学的迅猛发展,而且有证据表明,基因工程的进一步发展仍然要依赖于分子生物学研究的发展。

    顾名思义,分子生物学就是研究生物大分子之间相互关系和作用的一门学科,而生物大分子主要是指基因和蛋白质两大类;分子生物学以遗传学、生物化学、细胞生物学等学科为基础。从分子水平上对生物体的多种生命现象进行研究;分子生物学在理论和实践中的发展也为基因工程的出现和发展打下了良好的基础,人ELISA试剂盒是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。
人ELISA试剂盒中zui常用的酶为HRP和ALP。
(1)HRP:是一种糖蛋白,含糖量约18%,分子量为44kD,在蔬菜作物辣根中含量很高。HRP是一种复合酶,由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素) 结合形成一种卟啉蛋白质。主酶为五色糖蛋白,在275nm波长处有zui高吸取峰;辅基是深棕色的含铁卟啉环,是酶的活性基团,在403nm波长处有zui高吸取峰。HRP的纯度用纯度值(reinhartzahl,RZ)表示,RZ=A403nm/A275nm,即403nm的吸光度与280nm的吸光度之比,高纯度HRP的RZ值应≥3.0。HRP质量的另一重要指标是酶活力,以单位(unit,U)表示。用于标记的HRP比活性应≥250U/mg。HRP的作用底物为H202,催化下列反应;
在现在的ELISA商品试剂盒中,必然有使用微量加样器加入。

    注意的关键点是:加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。人ELISA试剂盒出现气泡则反应液界面有差异。所以,有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的错误所致。

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