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2015年ELISA检测系统的关键要素大盘点
发布时间:2015-04-22   点击次数:698次

    在ELISA检测系统的关键要素中,包被原的性质很重要,蛋白浓度,是否降解,这关系到你做出的抗体可不可以被其识别,所以保留抗原很重要,ELISA试剂盒我做重组蛋白时,一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲,从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。但有时因为试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。
    试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本,干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子(或受体)的水平。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体;②酶标记的抗原或抗体;③酶作用的底物。
    根据ELISA试剂盒试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。
(1) 双抗体夹心法;
(2) 双位点一步法;
(3) 间接法测抗体;
(4) 竞争法;
(5) 捕获法测IgM抗体;
(6) 应用亲和素和生物素。
试剂盒普遍用作非放射性同位素的成键化验。在这种方法中,通常标准配体是固定的,通过加入溶液相受体或蛋白质来使之成键。通过加入与受体特异性反应的抗体来定量成键的受体,而且zui初抗体的量以加入第二种能显色的抗体测量。第二种抗体能识别抗体的末端,在其末端的碱性磷酸酯或过氧化物酶等与酶发生反应,从而使溶液显色。
操作注意:
(1) 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20 分钟。
ELISA试剂盒从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
(2) 实验中不用的板条应马上放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
(3) 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
(4) 所有液体组分使用前充分摇匀。

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